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Himedia维生素B12测定培养基
更新时间:2024-05-15
品名:Himedia维生素B12测定培养基
英文:Vitamin B12 Assay Medium
货号:M036
品牌:HiMedia
用途:维生素B12的微生物法测定
原理                                  
乳酸杆菌生长需要特别的营养,因而在非选择性培养基上很难生长。维生素测定用培养基用于维生素的微生物法测定。该方法需要三种培养基:即维持培养基,用于保持菌种活

品名:Himedia维生素B12测定培养基

英文:Vitamin B12 Assay Medium

货号:M036

品牌:HiMedia

用途:维生素B12的微生物法测定

原理                                  

乳酸杆菌生长需要特别的营养,因而在非选择性培养基上很难生长。维生素测定用培养基用于维生素的微生物法测定。该方法需要三种培养基:即维持培养基,用于保持菌种活力;接种培养基,用于测试菌液的制备;测定用培养基,用于待测维生素的定量。

HiMedia维生素B12测定培养基,不含维生素B12,但包含所有其他维生素和必要养分,用于莱士曼乳酸杆菌(ATCC 7830)的生长。莱士曼乳酸杆菌(ATCC7830)作为测定用菌,最早由Capp等人描述(1)并被美国药典和美国分析化学家协会(AOAC)所推荐(2,3)。

用已知稀释度的维生素B12标准品,可以制备标准曲线(2,3)。

测试菌液的制备是将将活化后的菌株接种到乳酸杆菌肉汤培养基中,推荐在37°C 孵育24 小时,再离心、清洗、重悬于10 ml 生理盐水中,再通过浊度分析或酸度分析,确定生长反应。用维生素B12的浓度及对应的吸光度制作标准曲线。用标准曲线可确定待测样本中的维生素B12的浓度。

应非常小心地避免培养基和玻璃器具的污染。应使用洁净的无去污剂的玻璃器具。少量的外源物质的污染可能导致错误的结果。用于接种的测定菌应在专用的培养基中培养。

 

应用                                     

HiMedia维生素B12测定培养基推荐采用莱士曼氏乳酸杆菌(ATCC 7830)作为测定用菌,进行维生素B12的微生物法测定。


质量控制                             

Ÿ   外观——奶油色至黄色,具均匀性,倾向形成可容易分解成粉末状的软块

Ÿ   制备好的培养基颜色和透明度——淡琥珀色透明溶液,可能有轻微沉淀

Ÿ   配比浓度——在25°C下8.5%w/v(8.5g/100ml水)水溶液,pH值为6.1±0.2

Ÿ   pH值——5.90-6.30

 

配置                                

称取8.45g干粉培养基溶于100ml蒸馏水,必要时加热使培养基溶解。混匀,使轻微的沉淀均匀分布。测定时,分装试管,每管为5ml培养基(包含标准品和待测样品)。加蒸馏水,使总体积达到10ml。高压消毒15磅121°C 5分钟。立即冷却培养基。每个试管(10 ml)的维生素B12水平为0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2 ng时,均可获得满意结果。

培养反应                            

进行微生物法测定维生素B12。采用莱士曼氏乳酸杆菌(ATCC7830),35-37°C孵育18-24小时。

生长状况                            

随着测定管标准品水平升高,(美国药典维生素B12标准水平,0,0.025,0.050,0.075,0.1,0.125,0.150,0.2ng),目标菌生长逐渐递增,伴随着620nm处吸光度的增加。


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